ELISA常見樣本：

液體樣本、固體樣本、植物樣本

       收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測的標(biāo)本儲存在4℃?zhèn)溆?。如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。但注意避免反復(fù)凍融。可用于ELISA實驗的樣本一般有血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及組織勻漿等。不同樣本類型的預(yù)處理方法也不同。適當(dāng)?shù)臉颖绢A(yù)處理是確保ELISA實驗正確性和準(zhǔn)確性的第一步。這里，我們將介紹幾種不同樣本類型的處理方法：

一. 液體樣本：

【血清】：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注意事項：在收集血液樣本的過程中應(yīng)避免溶血。

【血漿】： 用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

【細(xì)胞培養(yǎng)上清】:取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測。 

【尿液、唾液、腦脊液】：用無菌管收集，2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

二. 固體樣本：（稱取1g的固體樣本，用9ml的合適緩沖液溶解，分泌蛋白可以直接離心取上清檢測，細(xì)胞內(nèi)的蛋白，要先收集細(xì)胞，再用合適方法破碎，離心取上清測試。）

【組織標(biāo)本】：加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。 通常按組織重量:PBS體積=1:9的比例勻漿,例如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,檢測后計算樣品濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù) 。

【土壤樣本】：

1， 稱取土壤500mg左右，必須保持鮮重，按照重量和體積比加入1:9的PBS溶液（PBS的濃度為0.01mol/L,PH控制在7.2-7.4），例如稱取的是0.5g加入5ml的PBS，稱取的重量不要求保持一致，但勻漿的比例都是按照1:9的關(guān)系來。

2， 進(jìn)行渦旋震蕩，充分混勻，渦旋時間30秒

3， 離心取上清，離心轉(zhuǎn)速為4000轉(zhuǎn)每分，時間為15分鐘左右，取上清液待檢測。

【培養(yǎng)細(xì)胞】： 檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

細(xì)胞裂解方法：

）貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化，離心收集細(xì)胞（懸浮細(xì)胞可直接離心收集） ；

2）將收集到的細(xì)胞用冷PBS 洗3次；

3）物理方法裂解細(xì)胞（可先超聲破碎細(xì)胞，再反復(fù)凍融） ：

       ? 超聲破碎：取適量PBS 重懸細(xì)胞，用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂；

       ? 反復(fù)凍融：將待破碎的細(xì)胞在-20 度以下冰凍，室溫融解，反復(fù)3次，使細(xì)胞溶脹破碎；

4）將標(biāo)本于2-8 度 1500×g 離心 10 分鐘，收集上清備用。

三. 植物樣本：

1、 新鮮植物組織請在液氮中充分研磨，如無液氮，剪碎，玻璃勻漿器研磨也可；

2、 加入樣品體積9倍（鮮重：勻漿液體積）的提取液（0.1mmol PH7.4 PBS ）, 4℃浸提2h；

3、 請于4℃ ，3000rpm，離心10min，收集上清；

4、 取上清檢測。 

【細(xì)菌裂解液】：

1、 收集細(xì)菌懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤洗3次。

2、加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)菌。通常6孔板一個孔的細(xì)菌量需要150~250μL PBS重懸。

3、 將樣品放入-20℃或-80℃，用高壓細(xì)菌破碎機或者使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復(fù)凍融幾次，使細(xì)菌充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎，以達(dá)到裂解的目的。

4、 4℃ 10000×g 離心10min，除去細(xì)菌碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。